饲料添加剂木聚糖酶活力检测

GB/T 23874-2009饲料添加剂木聚糖酶活力的测定分光光度法

1范围

本标准规定了用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。本标准适用于饲料添加剂木聚糖酶产品,*低检出量为10.0U/g.2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,﹐鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。还原性寡糖和单糖在沸水浴条件下可以与35-二硝基水杨酸(DNS)试剂发生显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中木聚糖酶的活力。

在37 ℃,pH为5.50的条件下﹐每分钟从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1 umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。

4试剂与溶液

除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合GB/T 6682中规定的二级水。

4.1氢氧化钠溶液,浓度为200 g/L

称取氢氧化钠20.0 g。加水溶解,定容至100 mL。

4.2乙酸溶液,浓度为0.1 mol/L

吸取冰乙酸0.60 mL。加水溶解,定容至100 mL。

4.3乙酸钠溶液,浓度为0.1 mol/L

称取三水乙酸钠1.36 g。加水溶解,定容至100 mL。

4.4乙酸-乙酸钠缓冲溶液,浓度为0.1 mol/L,pH为5.50

称取三水乙酸钠23.14 g,加人冰乙酸1.70 mL。再加水溶解,定容至2 000mL。测定溶液的pH。如果pH偏离5.50,再用乙酸溶液(4.2)或乙酸钠溶液(4.3)调节至5.50。

4.5木糖溶液(CHOs ),浓度为10.0 mg/mL

称取无水木糖1.000 g,加乙酸-乙酸钠缓冲溶液(4.4)溶解,定容至100 mL。

4.6木聚糖溶液,浓度为100 mg/mL