GB5009.82—2016食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定
1范围
本标准规定了食品中维生素A,维生素E和维生素D的测定方法。本标准第一法适用于食品中维生素A和维生素E的测定。
本标准第二法适用于食用油、坚果,豆类和辣椒粉等食物中维生素E的测定。本标准第三法适用于食品中维生素D。和维生素D。的测定。
本标准第四法适用于配方食品中维生素D。或维生素D的测定。
第一法惇食品中维生素A和维生素E的测定反相高效液相色谱法
2原理
试样中的维生素A及维生素E经皂化(含淀粉先用淀粉酶酶解)提取、净化,浓缩后,C。或PFP反相液相色谱柱分离v紫外检测器或荧光检测器检测,外标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1无水乙醇(CH,OH);经检查不含醛类物质,检查方法参见A.1.3.1.2抗坏血酸(CH.O:).
3.1.3氢氧化钾(KOH).
3.1.4︰醚[(CH,CH,):O];经检查不含过氧化物,检查方法参见A.2.3.1.5石油醚(C,HzOa):沸程为30℃~6o℃.
3.1.6无水硫酸钠(Na,So,).
3.1.7pH试纸(pH范围1~14)。
3.1.8甲醇(CH,OH):色谱纯。
3.1.9淀粉酶:活力单位≥100 U/mg.
3.1.102,6-二叔丁基对甲酚(Cs HO):简称BHT。
3.2试剂配制
3.2.1氢氧化钾溶液(50 g/100 g)﹔称取50 g氢氧化钾,加入50 mL水溶解,冷却后,储存于聚乙烯瓶中。
3.2.2石油醚-醚溶液(1＋1);量取200 mL石油醚,加入200 mL醚,混匀。
3.2.3有机系过滤头(孔径为0.22 um).3.3标准品
3.3.1维生素A标准品
视黄醇(Ca。H,O,CAS号:68-26-8);纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.2维生素E标准品
3.3.2.1 a-生育酚(C,HO.,CAS号:10191-41-0);纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.2.2β-生育酚(CaHO,CAS 号:148-03-8):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.2.3 r-生育酚(CaHgO:,CAS号:54-28-4);纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.2.4 8-生育酚(CH0:,CAS号;119-13-1);纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1维生素A标准储备溶液(0.500 mg/mL):准确称取25,0 mg维生素A标准品﹐用无水乙醇溶解后,转移入50mL容量瓶中,定容至刻度v此溶液浓度约为0.500 mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中,密封后,在一20℃下避光保存v有效期1个月。临用前将溶液回温至20 ℃,并进行浓度校正(校正方法参见附录B)。
3.4.2维生素E标准储备溶液(1.00 mg/mL);分别准确称取ar生育酚、β生育酚、r生育酚和8-生育酚各50.0mg,用无水乙醇溶解后,转移入50 mL容量瓶中,定容至刻度﹐此溶液浓度约为 1.00mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中,密封后,在一20 ℃下避光保存,有效期6个月。临用前将溶液回温至20℃,并进行浓度校正(校正方法参见附录B)。
3.4.3维生素A和维生素E混合标准溶液中间液:准确吸取维生素A标准储备溶液1.00 mL和维生素E标准储备溶液各5.00 mL于同一50 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度﹐此溶液中维生素A浓度为10.0 pg/mL,维生素E各生育酚浓度为100 ug/mL。在一20℃下避光保存,有效期半个月.
3.4.4维生素A和维生素E标准系列工作溶液;分别准确吸取维生素A和维生素E混合标准溶液中间液0.20 mL,0.50 mL,1.00mL,2.00 mL,4.00 mL,6.00 mL于 10 mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度﹐该标准系列中维生素A浓度为0.20pg/mL,o.50 ug/mL、1.00 ug/mL、 2.00 ug/mL,4.00 ug/mL,6.00ug/mL,维生素E浓度为2.00 ug/mL、5.00 pug/mL、10.0 pug/mL、20.0 ug/mL,40.0pug/mL,60.0 ug/mL。临用前配制。
