1.抗活性的Arl1,小鼠单克l隆抗l体(货号26924):一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL(1mg/ ml),含有50%甘油和0.05%叠氮l化钠。该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arl1-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖(目录号30301):一小瓶– 400 μL 50%浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液(目录号30302):一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl,pH 8,750mMNaCl,50 mM MgCl2,5 mM EDTA,5%Triton X-100。
4.抗Arl1,小鼠单克l隆抗l体(目录号26056):一小瓶– 100 μL(1 mg / ml)
pH 7.4的PBS中含有50%的甘油。
5. 100 XGTPγS(货号30303):1瓶– 100 μl,10 mM,使用5 μLGTPγSGTP标记的0.5 mL细胞裂解物。
6. 100 X GDP(产品目录号30304):一个样品瓶– 100 μl,100 mM,使用5 μL GDP
GDP标记的0.5 mL细胞裂解物。
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑制l剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 MNaCl,0.05%Tween-20)
9.免l疫印迹封闭缓冲液(TBST包含5%脱脂奶粉或3%BSA)
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
?1X测定/裂解缓冲液:短暂混合5X储备液,并在去离子水中稀释至1X。 在使用前,添加蛋白酶抑制l剂,例如1 mMPMSF,10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。
试剂盒成分
特异性识别Cdc42活性构象的鼠单克l隆抗l体(Anti-active Cdc42, MouseMonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)):小管装--30ul(抗l体浓度是1mg/ml),抗l体溶于PBS(pH7.4)并包含50%的甘油和0.05%的叠氮l化钠。此抗l体可以特异性识别所有脊椎动物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) :小管装—400ul包含200ulProtein A/G agarose 和200ul20%乙醇溶液。(使用时溶液需要充分混匀,再吸取)
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303):小瓶装—30mL包含250 mMTris-HCl (pH 8.0),Arf3 antibody, 750 mM NaCl, 50 mMMgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体(Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)):小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml),抗l体溶于PBS(pH7.4)并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) :小管装—100ul (10 mM),实验中0.5mL细胞裂解液使用 5ul GTPγS标记。
100 X GDP (Catalog No. 30304) :小管装—100ul (100 mM),实验中0.5mL细胞裂解液使用5ul GDP标记。
GTPases的Rab家族调节真核水泡膜运输。 Rab35与两个血浆
膜和内体定位,并涉及到包括T细胞受体回收,卵母细胞卵黄蛋白回收和胞质分裂在内的各种过程。Rab35调节神经元样细胞中的神经突生长,并可以诱导突起。
当前没有直接测定法来测量Rab35 GTPases的活化。
NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆
特异性识别Rab35 GTP而不识别Rab Rab35 GDP的抗l体。鉴于...的高度亲和力
抗原的单克l隆抗l体,可以在短时间内进行激l活测定。这个
分析提供了可靠的结果,并具有一致的可重复性。
这些抗Rab35 GTP单克l隆抗l体也可以用于监测大鼠Rab35的激l活。
1细胞和组织中的免l疫组织化学。
NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒提供了一种简单快速的方法来监测
Rab35的激l活。每个试剂盒均提供足够的量以执行20个测定。
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