脊髓灰质炎病毒灭活试验
B.1试验原理
将规定感染滴度的脊髓灰质炎病毒悬液以一定比例与酸性电解水混合,作用至规定的时间后加入中和剂,终止酸性电解水的灭活作用,接种细胞﹐进行残留病毒感染滴度测定,然后与阳性对照组的病毒感染滴度进行比较,以确定其对病毒的灭活效果。
B.2灭活试验方法
脊髓灰质炎病毒(Ⅰ型疫苗株)悬液的制备按《消毒技术规范》(2002年版)进行。
B.3脊髓灰质炎病毒灭活试验燥作步骤
B.3.1妳取脊髓灰质炎病毒悬液0.05 mL加入到无菌试管中,再加人 0.05 mL有机干扰物,然后加入4.9mL酸性电解水,混匀,于20 ℃水域中作用至规定时间。
B.3.2取0.1 mL病毒与酸性电解水混合液,加入到含0.9mL中和剂的试管中。振打混合后,取样按《消毒技术规范》2002年版)2.1.1.10.4所示方法检测残留脊髓灰质炎病毒滴度。
B.3.3 阳性对照,用细胞维持液代替酸性电解水。其余步骤与试验组相同。
B.3.4︰阴性对照,用不含脊髓灰质炎病毒的完全培养基作为阴性对照,以观察培养基无污染,细胞是否生长良好。
B.3.5试验重复3次。
B.3.6︰根据各组的平均病毒感染滴度(TCID,),分别计算其对病毒的灭活对数值。
B.4评价规定
对脊髓灰质炎病毒,在3次试验中，阳性对照组病毒对数值为5~7,灭活对数值≥4.00，判为消毒合格。
B.5注意事项
B.5.1 对有机干扰物的要求与A.2.5.2相同。
B.5.2在病毒灭活试验中,每次均应设置阳性对照。
B.5.3 脊髓灰质炎病毒灭活试验操作应在生物安全Ⅱ级以上实验室内进行,避免造成操作人员实验室感染和对环境污染。
B.5.4操作人员应具有基本的病毒学实验工作经验,尽量使用移液器与无菌一次性吸头。
