病毒灭活试验检测流程消毒剂杀菌效果怎么测试

病毒灭活实验：试验流程

病毒灭活实验基本原理，是用体细胞感柒测定方法消毒杀菌因素功效前后左右（或对照实验与对照组）样版中病毒的量。以体细胞变病做为分辨指标值，明确每组病毒感染的感柒滴度，观查消毒杀菌因素对新式病毒的消灭实际效果。

1、悬液法病毒灭活实验

a) 取待测消毒液，用杀菌水硬度稀释液至所需浓度值的 1.25 倍，于 20 ℃±1 ℃沙浴中预留。

b) 病毒感染悬液的制取：取下-80 ℃超低温储存的新式病毒，室内温度解除冻结后，与有机化学影响物依照 1:1占比混和做为消毒液消灭实验用病毒感染悬液。

c) 消毒杀菌实验：取以上病毒感染悬液1份添加4份待检消毒液，马上搅拌并计时。功效至要求時间，马上取下 0.1mL，添加经评定达标的 0.9 mL 还原剂中搅拌；或用经评定达标的除药方式解决。

d)对照实验实验：呈阳性对照实验为病毒感染对照实验，观查病毒感染生长发育是不是优良，病毒滴度是不是做到实验规定；阴性对照组用体细胞保持液做为阴性对照，观查有零污染，细胞生长是不是优良。

e) 以上每组依照终点站稀释液法各自开展病毒滴度测量。实验反复 3 次。

f) 终点站稀释液法：用体细胞保持液看待滴定管样版做 10 倍系列产品稀释液，汲取样液 100μL，注射于单面细胞培养板上，每一个滴度注射 4 孔。在 36 ℃±1 ℃置放 1 h～2 h后，取下塑造板，拆换体细胞保持液。放进二氧化碳培养箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）塑造 3-4天，显微镜下观查细胞生长情况，纪录体细胞变病状况。

2、媒介法病毒灭活实验

a) 取待测消毒液，放置 20 ℃±1 ℃沙浴中预留。

b) 病毒载体的制取：取杀菌媒介片，滴染新式病毒晾晒预留。

c) 消毒杀菌实验：取病毒载体放置消毒杀菌因素，功效至要求的时间段后取下放进经评定达标的还原剂或冲洗掉液 1.0 mL 中，功效10 min,搅拌冲洗掉。消毒器械媒介设点应放置较难消灭位置，具体做法参考《消毒技术规范》。

f) 终点站稀释液法：用体细胞保持液看待滴定管样版做 10 倍系列产品稀释液，汲取样液 100μL，注射于单面细胞培养板上，每一个滴度注射 4 孔。在 36 ℃±1 ℃置放 1 h～2 h后，取下塑造板，拆换体细胞保持液。二氧化碳培养箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）塑造 3-4天，显微镜下观查细胞生长情况，纪录体细胞变病状况。

 病毒灭活实验：結果点评

满足以下a)和b)的消毒杀菌因素判为消毒杀菌实际效果达标：

a) 除去残余消毒液实际效果的还原剂评定实验达标；

b)悬液消灭实验，每一次实验对新式病毒应合理消灭，呈阳性对照实验病毒滴度对数据应≥5.0或媒介消灭实验，每一次实验对新式病毒应合理消灭，呈阳性对照实验病毒滴度对数据应≥4.0。