武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
悬浮细胞
1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂刺激。
2.进行细胞计数，然后通过离心沉淀细胞。
3.吸出培养基，并用冰冷的PBS洗涤两次。
4.完全除去PBS洗涤液，然后向细胞沉淀中加入冰冷的1X分析/裂解缓冲液
（每1 x 107池0.5 – 1 mL）。
5.通过重复移液裂解细胞。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。
7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果这
发生时，裂解液可通过27?号注射l器针头3-4次以剪切
基因组DNA。
8.通过离心10分钟（在4°C下为12，000 x g）清除裂解物。
9.收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用，或速冻并保存在-
70°C以备将来使用。
阳性和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意：体内刺激细胞会激l活大约10％的可用Rab35，而
体外GTPγS蛋白负载将激l活近90％的Rab35。
1.将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中（或使用1 μg纯化的Rab35蛋白）。
2.向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA（至20 mM终浓度）。
3.将5 μl 100 XGTPγS（至100 μM，终浓度）加到一个试管中（阳性对照）。
4.在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP（至1 mM，终浓度）（阴性对照）。
5.在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6.通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2（至60 mM）。
试剂盒成分
特异性识别Cdc42活性构象的鼠单克l隆抗l体（Anti-active Cdc42， MouseMonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管装--30ul(抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的叠氮l化钠。此抗l体可以特异性识别所有脊椎动物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管装—400ul包含200ulProtein A/G agarose 和200ul20%乙醇溶液。（使用时溶液需要充分混匀，再吸取）
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶装—30mL包含250 mMTris-HCl (pH 8.0)， 750 mM NaCl， 50 mM MgCl2， 5 mMEDTA，Rac1 kit， 5% Triton X-100。
特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（Anti-Cdc42， Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH7.4）并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管装—100ul (10 mM)，实验中0.5mL细胞裂解液使用 5ul GTPγS标记。
100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管装—100ul (100 mM)，实验中0.5mL细胞裂解液使用5ul GDP标记。
基因符号：RAB11
说明：抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体
背景：Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。
免l疫原：活性Rab11的重组全长蛋白
应用范围：IP，IHC
推荐的稀释液：IP：1μg，用于1?2 mg总细胞蛋白
IHC：1：50?100稀释
浓度：1 mg / ml
格式：液体
同种型：IgG2b
纯度：从腹l水中纯化
存储缓冲区：
防腐剂：否
成分：PBS（不含Mg2 +和Ca2 +），pH 7.4、150 mM NaCl，50％甘油
种属反应性：抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。
储存条件：储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期
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