小G蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。Rho家族是小G蛋白中的一个亚家族,它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的Cdc42就属于Rho亚家族中的一种,Cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式:与GTP结合的激l活状态和与GDP结合的非活性状态。
目前Cdc42蛋白活性的检测主要是依据小GTP酶Cdc42可以与p21活化激酶(PAK)的p21结合区域(PBD)结合,使PAK活化从而发挥生物学功能,进而间接的进行Cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度过快以及Cdc42-GTP结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力,导致这种检测方法的重复性较差。
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaCl,Rac1kit,0.05%
吐温20)
9.免l疫印迹封闭缓冲液(TBST包含5%脱脂奶粉或3%BSA)
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
GTPases的Rab家族调节真核水泡膜运输。 Rab35与两个血浆
膜和内体定位,并涉及到包括T细胞受体回收,卵母细胞卵黄蛋白回收和胞质分裂在内的各种过程。Rab35调节神经元样细胞中的神经突生长,并可以诱导突起。
当前没有直接测定法来测量Rab35 GTPases的活化。
NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆
特异性识别Rab35 GTP而不识别Rab Rab35 GDP的抗l体。鉴于...的高度亲和力
抗原的单克l隆抗l体,可以在短时间内进行激l活测定。这个
分析提供了可靠的结果,并具有一致的可重复性。
这些抗Rab35 GTP单克l隆抗l体也可以用于监测大鼠Rab35的激l活。
1细胞和组织中的免l疫组织化学。
NewEast Biosciences Rab35激l活检测试剂盒提供了一种简单快速的方法来监测
Rab35的激l活。每个试剂盒均提供足够的量以执行20个测定。
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