分析原理
NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒基于配置特异性抗Arl1-GTP从细胞提取物或体外检测活性Arl1-GTP水平的单克l隆抗l体GTPγS负载Arl1活化分析。简而言之，抗活性Arl1小鼠单克l隆抗l体将用含有Arl1-GTP的细胞裂解液培养。然后，Rackit，绑定的活动Arl1将被下拉蛋白质A/G琼脂糖。用抗Arl1兔多克l隆抗l体或抗Arl1小鼠单克l隆抗l体进行免l疫印迹分析，检测沉淀的活性Arl1。
需要但未提供的材料
1刺激性和非刺激性细胞裂解物
2蛋白酶抑制素
4°C摇管器或振动筛
40.5 M EDTA，pH8.0
51百万氯化镁
62X还原SDS-PAGE样品缓冲液
7电泳和免l疫印迹系统
8免l疫印迹洗涤缓冲液，如TBST（10 mM Tris HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05%
吐温-20）
9免l疫印迹阻断缓冲液（含5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白的TBST）
10PVDF或硝化纤维膜
11次级抗l体
12ECL检测试剂
Arf样蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPasesArf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。Arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与Arf1-6较相似，甚至共享几个共同的结合伴侣。除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有报道表明Arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
Arf6激l活测定。 经GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）处理后，纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
1.抗活性Arf6，小鼠单克l隆抗l体（货号26918）：一小瓶– 22 μL（1
含50％甘油和0.05％叠氮l化钠的PBS（pH 7.4）中的浓度（mg / ml）。 该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arf 6-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖（目录号30301）：一小瓶– 400 μL 50％浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液（目录号30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mMNaCl，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。
4.抗Arf 6，兔多克l隆抗l体（货号21032）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）
pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。
5. 100 XGTPγS（目录号30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγS标记0.5mL细胞裂解液。
6. 100 X GDP（产品目录号30304）：一个样品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP标记0.5mL细胞裂解物。
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